藥材及成方制劑顯微鑒別法

 藥材及成方制劑顯微鑒別法"藥材及成方制劑顯微鑒別法

 顯微鑒別系指用顯微鏡對藥材的切片、粉末、解離組織或表面製片及成方制劑中藥味的組織、細胞或內含物等特徵進行鑒別的一種方法。鑒別時選擇有代表性的樣品,根據各該藥材鑒別項的規定製片。成方制劑根據不同劑型適當處理後製片。

 一、橫切片或縱切片:選取藥材適當部位,軟化後用徒手或滑走切片法,切成10~20μm的薄片,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它試液處理後觀察。必要時可包埋後切片。

 二、粉末製片:取粉末少量,置載玻片上,攤平,選用甘油醋酸試液、水合氯醛試液或其它適當試液處理後觀察。

 三、表面製片:將樣品濕潤軟化後,切取一部分或撕取其表皮,加適宜的試液觀察。

 四、解離組織片:如樣品中薄壁組織佔大部分,木化組織少或分散存在,可用氫氧化鉀法;如果品堅硬,木化組織較多或集成較大群束,可用硝鉻酸法或氯酸鉀法。在解離前,應先將樣品切成寬或厚約2mm的小條或片。

 1.氫氧化鉀法

 置樣品於試管中,加5%氫氧化鉀溶液適量,加熱至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去鹼液,加水洗滌後,取出少量置載玻片上,用解剖針撕開,以稀甘油裝置觀察。

 2.硝鉻酸法

 置樣品於試管中,加硝鉻酸試液適量,放置,至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去酸液,加水洗滌後,照1.法操作裝置。

 3.氯酸鉀法

 置樣品於試管中,加硝酸溶液(1→2)及氯酸鉀少量,緩緩加熱,待產生的氣泡漸少時,再及時加入氯酸鉀少量,以維持氣泡穩定地發生,至用玻璃棒擠壓能離散為止,傾去酸液,加水洗滌後,照1.法操作裝置。

 五、花粉粒與孢子製片:取花粉、花藥(或小的花朵)或孢子囊群(乾燥樣品浸於冰醋酸中軟化),用玻璃棒搗碎,過濾於離心管中,離心,取沉澱加新鮮配製的醋酐與硫酸(9︰1)的混合液1~3ml,置水浴上加熱2~3分鐘,離心,取沉澱,用水洗滌2次,加50%甘油與1%苯酚3~4滴,用品紅甘油膠封藏觀察。也可用水合氯醛試液裝置觀察。

 六、細胞及細胞內含物等的測量:在顯微鏡下測量細胞及細胞內含物等的大小,可用目鏡測微尺測量。先將目鏡測微尺裝入目鏡內,用鏡台測微尺標化。標化時,轉動目鏡,移動鏡台測微尺,使兩種量尺的刻度平行,左邊的「0」 刻度重合,再找第二條重合刻度。根據兩條重合刻度間兩種量尺的小格數,計算出目鏡測微尺每小格在該物鏡條件下所相當的大小(μm)。測量時,以目鏡測微尺測量目的物的小格數,乘以每一小格的大小(μm)。通常是在高倍物鏡下進行,但欲測量較長的如纖維、非腺毛等的長度時,則以在低倍物鏡下測量較為方便。記錄最大值與最小值(μm),可允許有少量略高或略低於藥典規定的數值。

 七、細胞壁性質的檢定:

 1.木質化細胞壁

 加間苯三酚試液1~2滴,稍放置,加鹽酸1滴,因木化程度不同,顯紅色或紫紅色。

 2.木栓化或角質化細胞壁

 加蘇丹Ⅲ試液,稍放置或微熱,顯橘紅色至紅色。

 3.纖維素細胞壁

 加氯化鋅碘試液;或先加碘試液濕潤後,稍放置,再加硫酸溶液(33→50);顯藍色或紫色。

 4.硅質化細胞壁

 加硫酸無變化。

 八、細胞內含物性質的檢定:

 1.澱粉粒

 (1)加碘試液,顯藍色或紫色。

 (2)用甘油醋酸試液裝置,置偏光顯微鏡下觀察,未糊化的澱粉粒顯偏光現象;已糊化的無偏光現象。

 2.糊粉粒

 (1)加碘試液,顯棕色或黃棕色。

 (2)加硝酸汞試液,顯磚紅色。材料中如含有多量脂肪油,宜先用乙醚或石油醚脫脂後進行試驗。

 3.脂肪油、揮發油或樹脂(1)加蘇丹Ⅲ試液,顯橘紅色、紅色或紫紅色。

 (2)加90%乙醇,脂肪油不溶解(篦麻油及巴豆油例外),揮發油則溶解。

 4.菊糖

 加10%α-萘酚乙醇溶液,再加硫酸,顯紫紅色並很快溶解。

 5.粘液

 加釕紅試液,顯紅色。

 6.草酸鈣結晶(1)加稀醋酸不溶解,加稀鹽酸溶解而無氣泡發生。

 (2)加硫酸溶液(1→2),逐漸溶解,片刻後析出針狀硫酸鈣結晶。

 7.碳酸鈣(鐘乳體)

 加稀鹽酸溶解,同時有氣泡發生。

 8.硅質

 加硫酸不溶解。

 九、鑒別由粉末藥材製成的成方制劑時,散劑照上述粉末製片法製片;丸劑、片劑等,可取2~3丸(片)研細後,取少量樣品,滴加規定的試液,攪拌均勻,使粘結的細胞、組織散離,再按粉末特徵進行鑒別;蜜丸可直接挑取少量樣品製片,或酌用熱水脫蜜後製片觀察。

 附:顯微試液配製法

 三氯化鐵試液

 取三氯化鐵1g,加水使溶解成100ml,即得。

 水合氯醛試液

 (見附錄ⅩⅤ B)。

 甘油醋酸試液

 取甘油、醋酸及水各等份,混勻,即得。

 蘇丹Ⅲ試液

 (見附錄ⅩⅤ B)。

 釕紅試液

 取10%醋酸鈉溶液1~2ml,加釕紅適量使呈酒紅色,即得。

 本液應臨用新制。

 間苯三酚試液

 取間苯三酚1g,加90%乙醇100ml使溶解,濾過,即得。

 本液應置棕色玻璃瓶內,在暗處保存。

 組織解離液

 (1)取硝酸10ml,加入100ml水中,混勻。 (2) 取鉻酸10g,加水100ml使溶解。用時將二液等量混合,即得。

 品紅甘油膠

 取動物膠1g,加水6ml,浸泡至溶化,再加甘油7ml,加熱並輕輕攪拌至完全混勻,用紗布濾於培養皿內,加鹼性品紅溶液(鹼性品紅0.1g,加無水乙醇600ml及樟油80ml,溶解)適量,混勻,凝固後即得。

 α-萘酚試液

 取15%的α-萘酚乙醇溶液10.5ml,緩緩加硫酸6.5ml,混勻後再加乙醇40.5ml及水4ml,混勻,即得。

 銅氨試液

 取碳酸銅0.5g,加水適量,置乳體中研磨,再加濃氨溶液10ml使溶解,即得。

 硝酸汞試液

 取汞4.5g ,加發煙硝酸3ml,俟作用完畢,加等量水稀釋,即得。

 本液應置棕色玻璃塞瓶內,在暗處保存。

 氯化鋅碘試液

 取碘化鉀8g,加水8.5ml使溶解,再加無水氯化鋅2.5g使溶解,加碘適量至飽和,即得。

 本液應置棕色玻璃塞瓶內保存。"


隨機文章:




發表評論

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen:

圖片 表情