中藥材真偽的現代科學鑒別

中藥品種繁多,應用歷史悠久,產區廣泛。由於地理和歷史的原因,藥材品種混亂,基源複雜,如僅《中華人民共和國藥典》2000年版收載的534種中藥材,即有143種為多基源(二基源以上),占收載總數的27%。加之中藥的同名異物或同物異名現象普遍存在以及偽品、混淆品和誤用品等因素,對中藥的化學成分和藥理作用的研究、制劑生產、臨床療效及推廣使用等都有直接影響,嚴重影響了中醫藥的信譽。同時,即使是同種藥材,由於產地不同、野生與栽培以及生長年限不同都表現出質量和療效上的差異,這些問題為中藥材鑒別方法提出了新的挑戰,依賴經典形態分類以及傳統鑒別方法已無法滿足鑒別的需要。隨著各種先進儀器以及分子生物學的發展,各種新的鑒別方法亦紛紛推出,如紅外光譜鑒別、化學指紋圖譜鑒別以及DNA分子標記鑒別等,中藥材鑒別領域顯示出了蓬勃的生機。

近年來,以PCR為基礎的DNA分子標記鑒別技術在中藥材真偽鑒別中發揮了重要的作用,同時,在多基源品種的鑒別及道地藥材鑒別中也嶄露頭角,顯示出了巨大的前景。以人參、西洋參的分子標記鑒別研究為例,可以清楚地看出中藥材分子標記鑒別的研究軌跡。從1994年AP-PCR首次用於人參、西洋參的鑒別以來,已有24篇相關的報道,按照所用方法的不同可分為三種:1基於PCR技術的方法有18篇文獻,其中利用隨機引物如RAPD和Ap-PCR等的有9篇,利用特異引物如MARMS、SCAR等的3篇,AFLP的3篇,PCR-RFLP的3篇;2利用DNA測序技術的有7篇;3基於分子雜交的方法有1篇,主要針對重複序列。有的報道中同時使用兩種方法,如同時使用ITS序列分析與RAPD、PCR—RFLP和RAPD等。根據各個文獻發表時間及其使用的方法可以得到人參類藥材分子鑒定的發展特點:1隨機引物雖佔據主導地位,但隨著時間的推移,RAPD等方法逐漸推出舞台。無須預先知道基因組信息的特點,使RAPD在中藥材分子鑒定上成為最主要的方法,但隨著18S、matK基因的測序,新方法便得以誕生,如MARMS。同時,在RAPD基礎上發展起來的方法也顯示了極好的應用前景,如SCAR標記以及應用梯度PCR檢測中藥復方中人參的PCR引物均是從RAPD的特異條帶中得到的。2序列分析是各種新方法應用的基礎。植物核基因組中的rDNA是研究最為廣泛的基因之一,其中18S、ITS以及5S已成功的應用與人參西洋參的鑒別,可以直接利用測序後的鹼基變異作為鑒別指標也可以利用等位基因PCR直接檢測變異位點,從而通過電泳就可達到準確的鑒別。等位基因PCR簡單、快捷、目標明確,有非常大的推廣應用價值。此外,葉綠體基因中的編碼間隔區正逐漸成為分子系統學研究的熱點,如參類藥材對葉綠體基因中的matK以及trnC-trnD進行了測序。3簡單、快捷、準確是分子鑒定發展的趨勢。參類藥材分子鑒定的歷程基本是隨機引物—序列分析—PCR-RFLP—AFLP—特異引物PCR,體現了由複雜向簡單的過程。近兩年來,特異引物的應用以及在復方中參類藥材的成功檢出,標誌著參類藥材的鑒定達到了十分完美的地步。但這些僅僅解決了藥材的「真偽」問題,質量的「優劣」卻仍然沒有很好的方法,如山參與栽培人參、朝鮮人參與中國人參、美國西洋參與中國引種栽培西洋參的鑒別為我們提出了新的課題。

針對以上問題,可以在以下幾方面加強研究,以期達到「真偽優劣」鑒別的最終目標。

一、尋找進化速率快、種間高度變異的DNA序列進行測序分析。如葉綠體基因間隔區trnD-trnT,rpoB-trnC、trnH-psbA等。品種特徵DNA序列的獲得是將其轉化為簡易、高效的PCR鑒別以及高通量芯片鑒別的基礎,同時大量序列的獲得,也為中藥材比較基因組學的研究提供了可能和基礎。

二、大力開發新型實用的中藥材分子標記鑒別方法和試劑盒 。中藥材DNA降解嚴重,合適的DNA提取和鑒別方法的選擇是保證中藥材分子標記鑒別成功的基礎。因此,對已有的各種新型技術和方法,要進行篩選和改進以適於中藥材鑒別的需要。

三、積極與其他技術和方法聯用。不同的方法均存在一定的適用範圍和局限性,如由於DNA分子標記不受生物體發育階段的影響,無法鑒別不同生長年限的藥材,對同基源(基因型)的野生與栽培藥材的鑒別也存在一定困難,單一的DNA分子標記鑒別無法解決中藥材鑒別的所有難題。因此,積極尋找與各種新型方法技術的有機聯用,將可能為中藥材鑒別提供嶄新的空間。如目前飛速發展的代謝組學研究為中藥材代謝標識物鑒別提供了可能,高通量、高靈敏度的GC-TofMS和QTofMS等儀器能同時觀察上千個化合物,監測接近全景代謝物的變化,該方法不僅能觀測到主要活性化合物,還能檢測到代謝中間產物(包括非活性物質)的變化,不僅能反映植物基因型的差異,也能反映環境因素的作用。整合DNA分子標記與代謝標識物的「雙標記」方法,將有利於建立與藥材品質緊密連鎖的特異、高效的標記平台,為中藥材鑒別和質量控制提供新的方法和技術。

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